Obserwowano również łagodny wzrost innych typów komórek krwiotwórczych, takich jak komórki B CD19 +, komórki T CD4 + i komórki szpiku CD1b + Gr1 + w śledzionie (Figura 3E i Dodatkowa Figura 3F). Figura 3hSTAT5BN642H myszy cierpią na agresywny chłoniak z komórek T CD8 +. (A) Makroskopowe porównanie myszy i myszy LN z hSTAT5BN642H i hSTAT5B z myszami z WT. Paski skali: cm. (B) Zmodyfikowane przebarwienie Wrighta rozmazów krwi od myszy hSTAT5BN642H (N642H), hSTAT5B (hS5B) i WT (oryginalne powiększenie, × 100). (C) Liczba WBC przy użyciu licznika krwi zwierzęcej (scil Vet ABC). Współczynniki CD8 / CD4 w krwi obwodowej określono za pomocą cytometrii przepływowej. Analiza obejmowała 7- do 10-tygodniowe myszy WT (n = 20), hSTAT5B (n = 15) i myszy hSTAT5BN642H (n = 20). (D) Stosunki komórek T CD8 / CD4 w LN określono za pomocą cytometrii przepływowej. Analizy obejmowały 7-tygodniowe myszy WT (n = 5), hSTAT5B (n = 5) i myszy hSTAT5BN642H (n = 5). (E) Ilościowa ocena bezwzględnej liczby limfocytów T CD4 + i CD8 +, komórek szpikowych (CDllb + Grl +) i B (CD19 +) w śledzionach z myszy transgenicznych hSTAT5BN642H- i hSTAT5B i myszy WT. Analizy obejmowały 7-tygodniowe myszy WT (n = 13), hSTAT5B (n = 6) i hSTAT5BN642H (n = 6 i 11) myszy. (F) Komórki śledzione CD3 + CD8 + analizowano za pomocą cytometrii przepływowej pod kątem ich ekspresji CD25. Analizy obejmowały 8-tygodniowe myszy WT (n = 8), hSTAT5B (n = 9) i (n = 6) myszy hSTAT5BN642H. (G) Komórki śledzione CD3 + CD8 + dalej analizowano pod kątem ekspresji CD62L i CD44. Analizy obejmowały myszy WT (n = 8), hSTAT5B (n = 5) i hSTAT5BN642H (n = 5) w 8 tygodniu życia. Dane reprezentują średnią. SD. n. 6. ** P <0,01 i *** P <0,001, przez jednoczynnikową ANOVA z poprawką Bonferroniego. Zastosowano cytometrię przepływową do analizy markerów aktywacji limfocytów T (CD25) i markerów powierzchniowych dla subpopulacji limfocytów T, w tym naiwnych limfocytów T CD8 + (CD62LhiCD44lo), limfocytów T CD8 + centralnej pamięci (CD62LhiCD44hi) i limfocytów T CD8 + z pamięcią efektorową (CD62LloCD44hi) ( 38. 40). Ta analiza wykazała, że komórki białaczkowe eksprymują markery powierzchniowe wskazujące na dojrzałe komórki T z aktywowanym fenotypem i wysoką ekspresją IL-2R. (CD25), bezpośredni gen docelowy STAT5 (41) (Figura 3F). Pięćdziesiąt procent chorych komórek T CD8 + również eksprymowało markery przypominające centralne komórki T pamięci. Co więcej, stwierdziliśmy, że odsetek komórek eksprymujących markery komórek T pamięci efektorowej był podwyższony u chorych myszy w porównaniu z obserwowanym w grupie kontrolnej WT (Figura 3G). Duża liczba proliferujących komórek T była związana z powiększeniem śledziony i tworzeniem chłoniaków, a proliferujące komórki T silnie infiltrują narządy obwodowe, prowadząc do śmiertelnej niedrożności płucnej (Figura 4 i Suplementowa Figura 4). Figura 4 Wysoce proliferujące komórki T infiltrują do obwodowych narządów myszy hSTAT5BN642H. Analiza histologiczna z zastosowaniem barwienia płuc H & E, CD3 i Ki67 u myszy w wieku 8 do 10 tygodni, hSTAT5B, hSTAT5BN642H i WT. Dane są reprezentatywne dla 3 niezależnych eksperymentów. Pasek skali: 100 .m. Oryginalne powiększenie, × 20 i × 40 (wypustki). W celu zbadania, czy choroba limfocytów T u transgenicznych myszy hSTAT5BN642H może być transplantowana, przenieśliśmy komórki BM od myszy z mutantem lub myszy kontrolnych WT iv do nienapromieniowanych, pozbawionych odporności myszy otrzymujących NSG. Odbiorcy zmutowanych komórek stali się śmiertelnie chory około 3 miesiące po wstrzyknięciu (Figura 5A). Przeszczepy szpiku kostnego (BMT) wywoływały chorobę o fenotypie porównywalnym z fenotypem myszy transgenicznych hSTAT5BN642H. Choroba charakteryzowała się powiększoną śledzioną i tworzeniem chłoniaków, z naciekaniem limfocytów T do narządów obwodowych (Figura 5B i Suplementowa Figura 5, A i B) spowodowanymi nadmierną ekspansją i infiltracją komórek T CD8 + (Figura 5, C i D) [więcej w: płesznik, płatki jaglane właściwości, pekan ]
