Aby to przetestować, wykorzystaliśmy AAV-hMD3q, który pośredniczy w ekspresji zależnej od Cre receptora sprzężonego z Gq aktywowanego wyłącznie przez projektant leków (DREADD), umożliwiającego stymulację N-tlenkiem klozapiny (stymulowane CNO) aktywacji Cre -presję neuronów w regionie, w którym wstrzyknięty jest wirus. Wstrzyknęliśmy AAV-hMD3q osobno do PAG lub PBN myszy LeprCre i zbadano indukcję c-Fos w tych regionach po podaniu CNO (Suplementowa Figura 4). Traktowanie CNO myszami, którym wstrzyknięto PAG promowało akumulację c-Fos w PAG i PBN, podczas gdy CNO promowało silną akumulację c-Fos w PBN myszy, którym wstrzyknięto PBN, ale niewiele w PAG. Tak więc, neurony LepRbPAG leżą do i stymulują neurony PBN. Aby określić, czy neurony PAG, w tym komórki LepRbPAG, leżą w bezpośrednim kontakcie synaptycznym z obwodem LepRbPBN . VMN, wstrzyknęliśmy AAV-TVA + G do PBN myszy LepRbL10a-GFP, a następnie wstrzyknięto szczepionkę Rabies-P-mCherry do VMN do pośredniczenia w infekcji zaprojektowanych przez VMN neuronów LepRbPBN (LepRbPBN a VMN) specyficznie i do znakowania komórek, które leżą synaptycznie doprowadzając do tych komórek (Figura 3A). Ta analiza ujawniła komórki zakażone wirusem Wściekli-G G-mCherry. w PBN, jak również identyfikację aferentnych neuronów VMN LepRbPBN w PAG i w kilku innych pobliskich obszarach (Figura 3B). Obserwowaliśmy również aferenty neuronów VMN LepRbPBN w bardziej odległych rejonach, w tym DR, jądro przykomorowe podwzgórza, jądro zło krocza i centralne jądro jądra migdałowatego (CeA) (Suplementalna Figura 5). Oprócz wykazania spodziewanej infekcji wielu komórek LepRbPBN zawierających GFP przez wewnątrz-VMN Wściekliźnie-P-mCherry (Figura 3C), niektóre (<10%) neuronów PAG doprowadzających do komórek VMN LepRbPBN . zawierały GFP (Fig. 3D), ujawniając, że neurony LepRbPAG należą do komórek PAG, które projektują i łączą się z komórkami LepRbPBN wyrzucającymi VMN. Rycina 3 Neurony PAGLepRb unerwiają neurony PBNLepRb wyściełające VMN. (A) Myszom LepRbeGFP-L10a wstrzyknięto AAV-TVA + G do PBN, a następnie doszło do wadliwego pseudotypowego wstrzyknięcia wirusa wścieklizny wywołującego mCherry (Wściekli-k G-mCherry) do VMN. Pięć dni później myszy poddawano perfuzji, a mózgi zbierano, dzielono i barwiono pod kątem GFP (zielony) i dsRed (czerwony) (B. D). Pokazane są obrazy reprezentatywne dla 4 podobnych przypadków: (B) PAG, PBN i okolic (tylko mCherry); (C) PBN (połączony obraz); (D) PAG (scalony obraz). Linie przerywane w B oznaczają granice PAG i PBN. Pręty skali: 100 .m. Neurony LepRbPAG aktywują SNS i zwiększają poziom glukozy we krwi. Podsumowując, nasze dane sugerują, że komórki LepRbPAG projektują i aktywują neurony w obwodzie VNN PBN, co oznacza, że aktywujące neurony LepRbPAG powinny naśladować CRR, aktywując SNS i zwiększając stężenie glukozy we krwi. W celu określenia odpowiedzi fizjologicznych i behawioralnych na aktywację komórek LepRbPAG i LepRbPBN, wstrzyknęliśmy AAV-hMD3q do PAG lub PBN myszy LeprCre i zbadano ich odpowiedzi na CNO (Figura 4A). Zaobserwowaliśmy 1663. 364 (średnia . SEM; n = 7) komórki wyrażające PBN hM3Dq i 2853. 422 (średnia . SEM; n = 9) komórek eksprymujących PAG hM3Dq w naszym badaniu. Początkowo zaobserwowaliśmy, że aktywacja jednego z zestawów neuronów LepRb zwiększyła aktywność lokomotoryczną (Suplementalna Figura 6), zgodna ze zwiększonym napędem SNS po aktywacji tych komórek. Rzeczywiście, podawanie CNO myszom eksprymującym hMD3q w komórkach LepRbPBN lub LepRbPAG zwiększało aktywność nerwów współczulnych nadnercza (SNA) (Figura 4, B i C), chociaż aktywacja za pośrednictwem neuronów LepRbPBN stała się statystycznie istotna we wcześniejszych czasach niż dla neuronów LepRbPAG [więcej w: płatki jaglane właściwości, gimnazjum nr 1 gryfice, przewlekła niewydolność żylna ]
