Dodatkowo, iniekcja formaliny aktywowała w przybliżeniu 23% neuronów LepRb (1862. 106 komórek, średnia. SEM; n = 5) w sąsiedniej PAG (neurony LepRbPAG) (Figura 1, G i H), chociaż glukopropalacja nie aktywowała komórek LepRbPAG (Ryc. 1, I i J). Integracja neuronów LepRbPAG z obwodem VNN PBN. Ponieważ szkodliwa ekspozycja na bodziec aktywuje zarówno neurony LepRbPAG, jak i LepRbPBN (podczas gdy glukooprolacja aktywuje tylko komórki LepRbPBN), a ponieważ PAG odbiera i integruje sygnały związane z bodźcami szkodliwymi, postawiliśmy hipotezę, że neurony LepRbPAG mogą reprezentować środki, za pomocą których informacje dotyczące szkodliwych bodźców wchodzą do PBN. . Obwód VMN. Aby to przetestować, wstrzyknęliśmy AAV-SynGFP (który pośredniczy w indukowanej przez Cre ekspresji białka fuzyjnego synaptophysin-GFP w celu ujawnienia końcówek synaptycznych) w PAG myszy LeprCre; w tym samym czasie wstrzyknęliśmy AAV-map2c-dsRed (który pośredniczy w indukowanej przez Cre ekspresji białka fuzyjnego map2c-dsRed, które identyfikuje drzewo dendrytyczne) w PBN tych samych myszy (Figura 2A). To ujawniło pole projekcyjne neuronów LepRbPAG, które gęsto unerwiają PBN i wykazało, że wiele terminali synaptycznych z tych komórek znajduje się w regionie PBN, który zawiera drzewo dendrytyczne neuronów LepRbPBN (Figura 2, B i C). Znaleźliśmy również terminale z neuronów LepRbPAG w grzbietowo-rdzeniowym podwzgórzu (DMH) i grzbietowym grzbiecie (Supplemental Figure 2), chociaż były one znacznie rzadsze niż w PBN. Ryc. 2 Neurony neuronów PAGLepRb do PBN. (A) Myszom LeprCre wstrzyknięto AAV-Syn-GFP do PAG i AAV-map2c-dsRed do PBN. Myszy poddano perfuzji; (B i C) mózgi zebrano, podzielono i zabarwiono na GFP (zielony) i dsRed (czerwony). Obrazy są reprezentatywne dla 3 podobnych przypadków. Linie przerywane wskazują granice PAG i PBN. Box in B pokazuje powiększony obszar przedstawiony w C. (D) Myszy LeprCre / eYFP zostały wstrzyknięte AAV-TVA + G do PAG; 2 tygodnie później, do PBN wstrzyknięto wadliwy pseudotypowany wirus mysim wścieklizny wyrażający mCherry (Wścieklizna-G-mCherry). Pięć dni później myszy perfundowano, a mózgi zbierano i dzielono. Skrawki mózgu barwiono pod kątem GFP (zielony) i dsRed (czerwony) (E i F). Obrazy są reprezentatywne dla 4 podobnych przypadków. H pokazuje powiększony obraz G. Skala słupków: 100 .m. IC, gorszy wzgórek; Aq, akwedukt mózgowy. Zastosowaliśmy monosynaptyczne śledzenie wsteczne za pośrednictwem wścieklizny (18) w celu zbadania obwodów komórek LepRbPAG wystających PBN. W tym układzie wstrzyknięcie wirusa pomocniczego AAV-TVA + G pośredniczy w ekspresji TVA w neuronach zawierających Cre, aby umożliwić ich infekcję przez pseudotypowany, delecjonowany G, mysim wirusem rusowskim (Rabies-aG-mCherry). AAV-TVA + G pośredniczy także w ekspresji G zależnej od Cre, umożliwiając przejście od Wścieklizny-G G-mCherry wstecznej synapsy do neuronu wytwarzającego Cre. Wstrzyknęliśmy AAV-TVA + G do PAG myszy LeprCre-eYFP, a następnie dostarczono wściekliźnie-G-mCherry do PBN (Figura 2, Dł.H). To nie tylko zainfekowało wiele komórek LepRbPAG za pomocą wirusa Wścieklizna-G-mCherry (zgodnie z naszą identyfikacją PBN jako głównego celu projekcyjnego komórek LepRbPAG), ale także ujawniło liczne Wrzodziejące wścieklizny zawierające. Komórki LepRbPAG, szczególnie w PAG. Obserwowaliśmy również aferenty do obwodu LepRbPAG-PBN w bardziej odległych miejscach, w tym grzbietowej (DR) (Supplemental Figure 3); zaobserwowaliśmy kilka aferentów w innych miejscach i brak w rdzeniu kręgowym, sugerując niewielki lub żaden bezpośredni wpływ z obwodowych neuronów nocyceptywnych. Tak więc, większość sygnałów neuronowych do obwodu LepRbPAGPBNN wchodzi przez inne komórki PAG. Ponieważ komórki LepRbPAG rzutują na PBN i zawierają pobudzające neuroprzekaźniki (takie jak Glu i CCK), aktywacja komórek LepRbPAG powinna stymulować neurony w PBN
[hasła pokrewne: gimnazjum nr 1 gryfice, pekan, przewlekła niewydolność żylna ]
