W teście usuwania ogona myszy indywidualnie unieruchamiano podczas badania, aby określić opóźnienie w usuwaniu ogona z światła 75 stopni na 3 oddzielnych przykładach; średnia z 3 wystąpień została wykorzystana jako indywidualny punkt danych. Do testu tylnej łapy myszy pozwolono aklimatyzować się z komorą z pleksiglasu na godzinę przed testowaniem. 75-stopniowe światło zostało następnie skoncentrowane na tylnej łapie nieruchomej myszy i zarejestrowano opóźnienie tylnej łapy w odejściu od światła (36). Podobnie jak w teście z trzaskiem, 3 oddzielne instancje tego testu zostały zarejestrowane i uśrednione dla pojedynczego punktu danych. Pomiar oddechowy. Wyjściowa wentylacja i reakcja wentylacji na hiperkapnię mierzono u swobodnie poruszających się, świadomych 14 do 18-tygodniowych myszy z użyciem pletyzmografu całego ciała (Emka Technologies). Zbiorniki gazu O2, N2 i CO2 podłączono do pletyzmografu i sterowano cyfrowo za pomocą pletyzmografu, aby dostarczyć mieszaniny gazów do każdej komory z pletyzmografem. Każdą mysz umieszczono w komorze na 20 minut w celu aklimatyzacji. Po aklimatyzacji mierzono wyjściową wentylację, podczas gdy myszy eksponowano na powietrze pokojowe (np. 21% O2, 79% N2, 0% CO2). Aby określić reakcję wentylacji na hiperkapnię, stężenie CO2 w komorze podniesiono do 3% przez okres 4 minut, oddzielono pięciominutowymi okresami powrotu do zdrowia w powietrzu pokojowym (podobnie jak w 37), podczas gdy częstotliwość oddychania w czasie rzeczywistym była nagrany. W miarę wzrostu CO2 obniżono N2, aby umożliwić ustabilizowanie poziomu O2 na poziomie 21%. W sumie myszy pozostawały w pletyzmografie przez około godzinę. Wszystkie pomiary oddechowe rejestrowano między godziną 8 a 13. Podczas rejestracji myszy były stale monitorowane przez badacza, aby upewnić się, że pozostają przytomne (ponieważ reakcja wentylacji jest stępiona przez sen, pozycja 37). Jeśli mysz zasnęła, badacz podniecił zwierzę delikatnie stukając w komorę. Statystyka. Metody statystyczne nie zostały użyte do określenia wielkości próby, ale nasze rozmiary próbek są podobne do tych w wcześniej opublikowanych badaniach przy użyciu podobnych podejść (8, 17, 37. 39). Rozmiary próbek dla grup, które obejmowały stereotaktyczne wstrzykiwanie określonych populacji komórek, były o 40% większe niż dla innych grup, co odpowiadało obustronnemu trafieniu 50%. 60%. Dane dotyczące c-Fos i aktywności analizowano za pomocą testu t-tailed. Dane dotyczące stężenia glukozy we krwi analizowano za pomocą dwuczynnikowej ANOVA o powtarzanych pomiarach z testem post hoc Fishera o najmniejszej różnicy (LSD). Dane SNA z Adrenal analizowano za pomocą testu t-tailed z 5-minutowymi przedziałami w trakcie eksperymentu. Żadne dane nie zostały usunięte, chyba że wstrzyknięcie było pominięciem lub zwierzę było chore lub zranione w czasie eksperymentu (utrata> 10% masy ciała). Dane, które nie podlegały dystrybucji normalnej lub tej samej wariancji, zostały przekształcone w logi, a następnie ponownie przeanalizowane. Istotność została ustalona na P. 0,05. Wszystkie dane analizowano za pomocą SigmaStat (Systat). Zatwierdzenie badania. Procedury zawarte w tym manuskrypcie zostały zatwierdzone przez odpowiednie Komitety ds. Użytkowania i opieki nad zwierzętami na Uniwersytecie w Michigan i na Uniwersytecie w Iowa. Wkład autora Autorzy zredagowali rękopis. JNF zaprojektował i przyczynił się do wykonania wszystkich eksperymentów, zinterpretował dane, przeprowadził testy statystyczne i napisał manuskrypt. MGM zaprojektował także wszystkie eksperymenty, zinterpretował dane i napisał manuskrypt. DA i RJS pomogły zaprojektować i przeprowadzić testy pomiaru oddechowego pokazane na Ryc. 4 i Ryc. 6. WP zaprojektował i wykonał mapę AAV-map2c-dsRed użytą na ryc. 2. CP pomógł zaprojektować i przeprowadzić testy glukozy pokazane na ryc. 4 i ryc. 5. TL przyczynił się do zaprojektowania i wykonania eksperymentów śledzenia wścieklizny. PBG wspomaga badania nad regulacją neuronów PAG LepRb. JS pomógł w przeprowadzeniu eksperymentów LepRbPAGKO i sprawdzeniu poprawności naszych modeli myszy użytych na rysunku 6 i Supplemental Figure 7. MJ pomógł w przeprowadzeniu eksperymentów PAG i PBN DREADD wykorzystanych na rysunku 4.
[przypisy: polipektomia, pasożyty wewnętrzne, oblicz obwód sześciokąta foremnego przedstawionego na rysunku obok ]
